常见问题
  • 1、冻存的PBMC复苏后可以再次冻存吗?
    1、未用完的新鲜PBMC在需要进行冻存前,需要确认细胞活率,活率>90%时方可冻存,活率低于90%时,不建议冻存;冻存时可以使用CS10冻存液重悬细胞,并使用程序性降温仪进行冻存,或者放入程序性降温盒后再放入-80℃冰箱中冻存24h,冻存好之后的PBMC需要转移至液氮中长期保存。 2、未用完的冻存PBMC,不建议再次冻存,反复冻融对细胞可造成不可预判的后果,可能会出现细胞活率降低、细胞结团、淋巴细胞增殖能力下降等等问题,对后续的实验结果有较大的影响。
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  • 2、冻存样本的接收与存储有哪些注意事项?
    1.细胞的冻存形态:请您在收到样本时检查冻存管中细胞的冻存形态,若冻存的细胞已融化,请您及时与我司联系,以免耽误后续实验; 2.细胞的标签信息:请您在确认细胞冻存形态正常时,确认细胞冻存管上面的信息,是否为您所需要的细胞类型、批次、规格; 3.存储方式:如以上信息确认无异常,请您在收到细胞后,24h内不使用时,可将细胞暂存于-80℃冰箱内或者干冰中,若长时间不用请直接保存于液氮中。
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  • 3、如何安全的进行细胞复苏?
    1.做好个人防护:在细胞复苏之前,请您严格按照二级防护标准进行穿戴胶乳手套、口罩、防护服、护目镜等个人防护装备 2.排出液氮小技巧:对于存储于液氮中的细胞,请用镊子取出,先将冻存管帽拧松半圈再拧紧,或者放入-80℃冰箱中5min之后取出,来释放进入冻存管中的液氮压力。 3.样本复苏:将冻存管置于37℃水浴中,轻轻搅拌直至冻存管中剩余一微小冰晶时取出(时间尽量控制在2分钟内,时间过长可能会造成细胞损伤风险)。水浴时注意不要让冻存管盖部分接触水,以降低污染风险。复苏完成后喷洒75%酒精迅速转移至生物安全柜中进行后续的操作。
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  • 4、为什么PBMC不推荐使用台盼蓝染色?
    1.台盼蓝染色原理:活细胞不被染色呈现中心透亮,死细胞能被跨膜染成实心的蓝色 2.台盼蓝染色的不足:1.台盼蓝染色时,原代细胞中的碎片、PBMC中残留的红细胞血小板等杂质碎片都可能被染色而被计数为死细胞;2.针对不同状态的细胞,台盼蓝着色的程度也不同,台盼蓝对于死细胞能完全染色,对于状态稍差的细胞也能部分着色而可能被标记为死细胞,从而导致计数活率与实际偏差较大(如下图1)。3.台盼蓝放置时间过久易结晶,导致结晶物也容易被计数成死细胞而影响细胞计数的数量与活率 3.作为原代的PBMC,细胞悬液中会存在红细胞血小板等碎片,且细胞状态不一致,因此导致台盼蓝染色的计数结果与实际有较大偏差 1.图片引用自中国生物器材网《台盼蓝、AO/PI荧光计数、明场计数染色法区别及所适用细胞样品类型》
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  • 5、请问混合淋巴细胞反应-MLR的强弱反应指标都有哪些?
    混合淋巴细胞反应(Mixed Lymphocyte Reaction, MLR)也称作混合淋巴细胞培养,是指在抗原提呈细胞刺激下,T细胞发生增殖和活化的强弱变化。传统检测方法是通过检测应答细胞的增值情况来反应MLR强度,如3-H、MMT等,但需要对刺激细胞进行γ射线照射等预处理,且耗时较长,大概需要7d。对的增值的上游,细胞早期活化状态检测,可以采用单克隆抗体与流式细胞术的结合,进行对于T细胞活化的指标如CD69的检测和分析,耗时减少,48H便能观察到最佳反应,此外,细胞因子的释放例如IFN-γ也可反应T细胞的激活或者抑制能力。
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