1、未用完的新鲜PBMC在需要进行冻存前，需要确认细胞活率，活率＞90%时方可冻存，活率低于90%时，不建议冻存；冻存时可以使用CS10冻存液重悬细胞，并使用程序性降温仪进行冻存，或者放入程序性降温盒后再放入-80℃冰箱中冻存24h，冻存好之后的PBMC需要转移至液氮中长期保存。 2、未用完的冻存PBMC，不建议再次冻存，反复冻融对细胞可造成不可预判的后果，可能会出现细胞活率降低、细胞结团、淋巴细胞增殖能力下降等等问题，对后续的实验结果有较大的影响。

1.细胞的冻存形态：请您在收到样本时检查冻存管中细胞的冻存形态，若冻存的细胞已融化，请您及时与我司联系，以免耽误后续实验； 2.细胞的标签信息：请您在确认细胞冻存形态正常时，确认细胞冻存管上面的信息，是否为您所需要的细胞类型、批次、规格； 3.存储方式：如以上信息确认无异常，请您在收到细胞后，24h内不使用时，可将细胞暂存于-80℃冰箱内或者干冰中，若长时间不用请直接保存于液氮中。

1.做好个人防护：在细胞复苏之前，请您严格按照二级防护标准进行穿戴胶乳手套、口罩、防护服、护目镜等个人防护装备 2.排出液氮小技巧：对于存储于液氮中的细胞，请用镊子取出，先将冻存管帽拧松半圈再拧紧，或者放入-80℃冰箱中5min之后取出，来释放进入冻存管中的液氮压力。 3.样本复苏：将冻存管置于37℃水浴中，轻轻搅拌直至冻存管中剩余一微小冰晶时取出（时间尽量控制在2分钟内，时间过长可能会造成细胞损伤风险）。水浴时注意不要让冻存管盖部分接触水，以降低污染风险。复苏完成后喷洒75%酒精迅速转移至生物安全柜中进行后续的操作。

1.台盼蓝染色原理：活细胞不被染色呈现中心透亮，死细胞能被跨膜染成实心的蓝色 2.台盼蓝染色的不足：1.台盼蓝染色时，原代细胞中的碎片、PBMC中残留的红细胞血小板等杂质碎片都可能被染色而被计数为死细胞；2.针对不同状态的细胞，台盼蓝着色的程度也不同，台盼蓝对于死细胞能完全染色，对于状态稍差的细胞也能部分着色而可能被标记为死细胞，从而导致计数活率与实际偏差较大（如下图1）。3.台盼蓝放置时间过久易结晶，导致结晶物也容易被计数成死细胞而影响细胞计数的数量与活率 3.作为原代的PBMC，细胞悬液中会存在红细胞血小板等碎片，且细胞状态不一致，因此导致台盼蓝染色的计数结果与实际有较大偏差 1.图片引用自中国生物器材网《台盼蓝、AO/PI荧光计数、明场计数染色法区别及所适用细胞样品类型》

混合淋巴细胞反应（Mixed Lymphocyte Reaction, MLR）也称作混合淋巴细胞培养，是指在抗原提呈细胞刺激下，T细胞发生增殖和活化的强弱变化。传统检测方法是通过检测应答细胞的增值情况来反应MLR强度，如3-H、MMT等，但需要对刺激细胞进行γ射线照射等预处理，且耗时较长，大概需要7d。对的增值的上游，细胞早期活化状态检测，可以采用单克隆抗体与流式细胞术的结合，进行对于T细胞活化的指标如CD69的检测和分析，耗时减少，48H便能观察到最佳反应，此外，细胞因子的释放例如IFN-γ也可反应T细胞的激活或者抑制能力。